基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨虾青素对心肌成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响
Effect of astaxanthin on expression of type Ⅰ and type Ⅲ collagen in cardiac fibroblasts and its mechanism based on TGF-β1/Smad3 signaling pathway
摘要目的 观察虾青素(astaxanthin,ASTX)对转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)诱导的心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)I型胶原(collegeⅠ,ColⅠ)和Ⅲ型胶原(collegeⅢ,ColⅢ)表达的影响,并探讨其作用机制.方法 分离新生乳鼠的CFs,TGF-β1诱导CFs,使用ASTX(0、5、10、20、40、80、160μmol·L-1)预处理CFs 24 h.采用MTT法测定不同浓度ASTX对CFs细胞活性的影响;采用DCFH-DA试剂盒检测CFs细胞内活性氧(ROS)生成;采用siRNA技术沉默Smad3基因,采用real-time PCR和Western blot检测Smad3沉默前后ColⅠ、ColⅢmRNA及ColⅠ、ColⅢ、Smad3蛋白表达水平.结果 ASTX在0~20μmol·L-1范围内不仅无明显的细胞毒性,且能够明显减少TGF-β1诱导的CFs内ROS生成(P<0.05).ASTX能够明显抑制TGF-β1诱导的CFs ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达(P<0.01),且呈浓度依赖性.此外,ASTX还可以明显下调TGF-β1诱导的CFs Smad3磷酸化(P<0.01);使用特异性siRNA对Smad3基因沉默后,ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达亦明显减少(P<0.01).结论 ASTX能够有效抑制TGF-β1诱导的CFs ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达,可能的机制是下调Smad3磷酸化.
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