抑制转位蛋白在氧糖剥夺/复糖复氧模型中对BV-2细胞损伤和自噬的影响

Effects of knocking down TSPO on proliferation and autophagy of BV2 cells in OGD/R models

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摘要目的观察转位蛋白TSPO对OGD/R致BV2小胶质细胞损伤的作用,并初步探究TSPO在该模型中的自噬机制.方法离体培养BV2小胶质细胞,将实验分为正常组、OGD/R组、OGD/R+小发夹RNA阴性对照组(OGD/R+NCshRNA)、OGD/R+TSPO小发夹RNA组(OGD/R+TS-POshRNA),细胞中TSPO mRNA和TSPO蛋白的表达量分别采用qRT-PCR、Western blot方法检测.为探讨TSPO在OGD/R中致BV2小胶质细胞损伤和自噬作用,采用CCK-8实验检测细胞活力、自由氧(ROS)检测细胞毒性,qRT-PCR检测各组自噬相关mRNA(p62 mRNA、LC3B mRNA、Beclin-1 mRNA)表达情况、Western blot检测各组中自噬相关蛋白(p62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1)表达情况.结果与正常组对比,OGD/R组中细胞TSPO mRNA和蛋白表达明显增高,细胞生存率明显降低,细胞毒性明显升高,LC3B mRNA、Bec-lin-1 mRNA水平升高,p62 mRNA表达量明显下降,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1蛋白水平升高,p62蛋白表达明显下降,自噬水平被激活;与OGD/R组比较,OGD/R+NCshRNA组细胞活力、细胞毒性和自噬水平差异无统计学意义,而OGD/R+TSPOshRNA组细胞生存率明显增高,细胞毒性和自噬水平明显降低.结论抑制TSPO在OGD/R模型中对BV2小胶质细胞损伤有明显的保护作用,该机制可能与抑制自噬相关.