小檗碱靶向TRIM25诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡

Berberine targeting TRIM25 induced cervical cancer HeLa cell apoptosis

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摘要目的研究小檗碱(berberine,BBR)诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制及其作用靶标.方法本研究利用药物亲和反应靶标稳定性技术(drug affinity responsive target stabili-ty,DARTS)联合蛋白质谱(mass spectrometry,MS)鉴定小檗碱潜在结合蛋白,利用微量热泳动技术(microscale thermo-phoresis,MST)测定小檗碱与候选靶蛋白结合亲和力强弱,利用细胞热转移分析技术(cellular thermal shift assay,CETSA)在活细胞中检测小檗碱与候选靶蛋白的结合情况;利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立候选靶蛋白TRIM25缺失的肿瘤细胞系;利用CCK-8法和Annexin V/碘化丙啶结合流式细胞术检测小檗碱对野生型和敲除细胞的抑制及促凋亡作用的差异;利用Western blot实验检测小檗碱对TRIM25及其底物蛋白水平的作用.结果 DARTS发现小檗碱处理后TRIM25对蛋白酶酶解的敏感性改变最明显,MST和CET-SA实验发现小檗碱与TRIM25在分子和细胞水平直接结合,且其体外结合解离常数为4.02μmol·L-1;成功构建TRIM25缺失的宫颈癌HeLa细胞系;TRIM25敲除明显缓解了小檗碱对HeLa细胞活力的抑制以及小檗碱诱导凋亡的作用;Western blot发现小檗碱降低HeLa细胞中TRIM25及其底物KLF5的蛋白水平.结论 TRIM25是小檗碱的潜在抗肿瘤靶标,小檗碱依赖TRIM25诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡.