摘要目的 探讨siRNA转染沉默Clk1基因对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型细胞自噬水平的影响.方法 采用MTT法及siRNA转染沉默Clk1基因技术,观察Aβ25-35、Clk1基因对细胞存活率的影响.细胞免疫荧光观察自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)表达情况.Western blot 检测Clkl、HIF-1α、PI3K/AKT/mTOR、自噬相关蛋白 Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62表达情况.实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测Beclin1、LC3、p62 mRNA水平的变化.结果 与NC+NS组相比,NC+Aβ组HT22细胞的活力明显降低(P＜0.01),而沉默Clk1后siClk1+Aβ组细胞活力较NC+Aβ组明显升高(P＜0.01).细胞免疫荧光结果显示NC+Aβ组LC3表达较NC+NS组明显升高(P＜0.01),siClk1+Aβ组LC3表达较NC+Aβ组明显降低(P＜0.01).Western blot结果显示与NC+NS组相比,NC+Aβ组Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显增加(P＜0.01),p62、PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白表达明显降低(P＜0.01);与NC+Aβ 组相比,siClk1+Aβ 组 Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ 蛋白表达明显降低(P＜0.01),p62、PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白表达明显增加(P＜0.01);加入LY294002和YC-1可以逆转沉默 Clk1 对 Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62、PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白的影响.RT-qPCR结果显示si-Clk1+Aβ+YC-1 组与 siClk1+Aβ 组相比,Beclin1、LC3、p62 mRNA水平无差异(P＞0.05),其余各组间比较Beclin1、LC3、p62 mRNA与蛋白水平变化一致.结论 沉默Clk1表达可以缓解Aβ25-35诱导的HT22细胞过度自噬引发的细胞存活率降低,其机制可能与PI3K/AKT/mTOR信号通路及HIF-1α相关.