金诺芬逆转非小细胞肺癌奥希替尼获得性耐药的作用

Auranofin reverses acquired resistance to osimertinib in non-small cell lung cancer

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摘要目的探讨金诺芬(auranofin,ANF)逆转非小细胞肺癌(non-small cell cancer,NSCLC)细胞奥希替尼(osimer-tinib,Osi)获得性耐药的作用.方法利用Osi敏感性NSCLC细胞株H1975和PC9,建立Osi获得性耐药的NSCLC细胞株H1975/OR和PC9/OR;通过CCK-8法在FDA批准的1 470种药物分子库中高通量筛选Osi获得性耐药的逆转剂,Compusyn软件计算Osi与ANF联用时的药物联合指数;CCK-8、EdU细胞增殖、流式细胞术、Transwell实验检测Osi、ANF及两者联用对Osi获得性耐药NSCLC细胞生长增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响;RNA-seq检测联合用药与单独用药后耐药株中差异变化的mRNA,目的基因和蛋白表达量用qRT-PCR和Western blot进行验证.结果与Osi敏感性H1975和PC9细胞相比,H1975/OR和PC9/OR在Osi处理后生长增殖能力明显升高,凋亡率明显降低,其耐药指数分别为70.31和136.99;在FDA批准的1 470种药物分子库中,只有ANF可同时增强Osi对两种耐药细胞株的杀伤作用;1μmol·L-1ANF 与 2 μmol·L-1 Osi 联用时,对 NSCLC 细胞Osi获得性耐药的逆转作用最为显著,可明显抑制耐药细胞株的生长增殖与侵袭、迁移能力,提高细胞凋亡率;联合用药后HSPB8和LC3-Ⅱ/LC3-I上调导致自噬增多.结论 ANF与Osi联用增强Osi对NSCLC耐药细胞的敏感性,其机制与HSPB8的上调导致自噬增多有关.