换一批雷公藤甲素诱导自噬促进人肾小管上皮HK-2细胞凋亡
Triptolide upregulates autophagy to promote apoptosis in human proximal tubular epithelial HK-2 cells
摘要目的 研究自噬在雷公藤甲素(triptolide,TP)诱导人肾近端小管上皮HK-2 细胞凋亡中的作用.方法 以HK-2细胞为研究对象,CCK-8 法检测细胞存活率;倒置荧光显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位MMP变化;激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内LC3荧光强度变化;Western blot检测细胞凋亡及自噬相关蛋白cleaved caspase 9、caspase 9、Bax、Bcl-2、LC3、p62 和Beclin 1的表达;采用自噬抑制剂 3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)和自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)研究自噬对TP诱导HK-2 细胞凋亡的影响.结果 TP降低HK-2 细胞存活率,诱导细胞凋亡和自噬,降低 MMP 水平,增加胞内LC3Ⅱ荧光强度,上调 Beclin 1 表达,下调 p62 表达,升高cleaved caspase 9/caspase 9、Bax/Bcl-2 和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值.此外,与 TP 组相比,3-MA+TP 组细胞内 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和cleaved caspase 9/caspase 9 比值降低,p62 表达上升,细胞增殖的抑制作用和促凋亡作用减弱.相反,与TP组相比,Rap+TP组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和cleaved caspase 9/caspase 9比值上升、p62 表达下降,细胞增殖的抑制作用和促凋亡作用增强.结论 TP能够诱导HK-2 细胞发生自噬和线粒体途径介导的细胞凋亡,抑制HK-2 细胞自噬可降低TP诱导细胞凋亡的发生,因此抑制自噬可能是减轻TP肾毒性的有效干预策略.
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关键词
雷公藤甲素HK-2细胞凋亡自噬肾毒性3-甲基腺嘌呤雷帕霉素triptolideHK-2 cellsapoptosisauto-phagynephrotoxicity3-methyladeninerapamycin
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DOI
10.12360/CPB202211043
发布时间
2023-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
山西省基础研究计划项目（No20210302123300）
山西省黄芪资源产业化与产业国际化协同创新中心项目（NoHQXTCXZXX2016-021）
山西省工程创新团队建设（2018-4;No11）
山西省自然科学基金（No201601D011112）
国家重点研发计划（No2019YFC1710803）
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