外源性硫化氢对肾小球系膜细胞缺氧/复氧损伤的影响及其机制

Effect of exogenous hydrogen sulfide on hypoxia/reoxygenation injury in glomerular mesangial cells and its mechanism

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摘要目的探讨外源性硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对肾小球系膜细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的影响,并阐明其相关作用机制.方法 H/R诱导小鼠肾小球系膜细胞系(SV40MES13)建立细胞损伤模型.细胞增殖试剂盒(CCK8)检测细胞活力,荧光探针技术分别检测H2S和活性氧(ROS)含量,生化试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡率;Western blot检测胱硫醚-γ-裂解酶(cystathione-gamma-lyase,CSE)、细胞凋亡相关蛋白(cleaved-caspase-3、Cyt c和Bcl-2)表达及信号通路相关蛋白(ERK1/2、Phospho-ERK1/2)活性.结果与对照(Control)组相比,缺氧/复氧(H/R)组细胞活力、内源性H2S含量CSE蛋白表达、SOD活性及Bcl-2蛋白表达均明显降低;细胞凋亡率、MDA和ROS含量、Cyt c及cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高;同时,磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)活性明显降低.与H/R比较,H/R+NaHS(外源性H2S供体)逆转了H/R对上述指标的影响.另外,PD98059(ERK1/2抑制剂)减弱了NaHS对磷酸化ERK1/2的作用.结论肾小球系膜细胞H/R损伤与内源性CSE/H2S系统下调有关;外源性H2S通过上调ERK1/2通路抑制氧化应激和细胞凋亡,减轻肾小球系膜细胞H/R损伤.