换一批肝星状细胞特异性Grk2基因敲除小鼠模型的制备及鉴定
Establishment and genotype identification of hepatic stellate cell-specific Grk2 gene knockout mouse model
摘要目的 利用Cre-loxP基因敲除技术建立肝星状细胞特异性G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor ki-nase 2,GRK2)基因敲除小鼠模型,为研究GRK2在肝星状细胞中的生物学功能提供动物模型基础.方法 将loxP标记的Grk2基因小鼠(Grk2fl/fl)和Lrat-Cre工具鼠进行多次繁殖,建立肝星状细胞特异性Grk2基因敲除(Grk2△HSC)小鼠模型.观察和分析小鼠的生长繁殖情况;通过PCR反应鉴定flox和Cre基因型;免疫荧光双染检测肝星状细胞中GRK2表达;Western blot检测小鼠肝星状细胞及肺、脾、肾脏、心脏组织中GRK2蛋白表达;HE染色观察肝脏及肺、脾、心脏、肾脏组织学形态.结果 成功鉴定Grk2△HSC小鼠基因型;两组小鼠体质量、繁殖能力无明显差异;免疫荧光双染及Western blot结果表明,Grk2△HSC小鼠的肝星状细胞中GRK2蛋白水平明显低于对照组小鼠,Grk2△HSC 小鼠肺、脾、肾脏和心脏组织中GRK2蛋白表达与对照组相比无明显变化;HE染色结果显示,Grk2△HSC小鼠肝脏及主要组织结构与Grk2fl/fl相比差异无显著性,可用于后续研究.结论 本研究应用Cre-loxP技术成功构建了肝星状细胞特异性Grk2基因敲除小鼠,为进一步研究GRK2在肝脏中的作用提供了优良工具.
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关键词
G蛋白偶联受体激酶2Cre-loxP重组酶系统细胞特异性敲除肝星状细胞基因鉴定繁育G protein-coupled receptor kinase 2Cre-loxP recombinase systemcell specific knockouthepatic stellate cellgenotyping identificationbreeding
栏目名称
DOI
10.12360/CPB202310009
发布时间
2024-02-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（No82370632）
安徽省高校杰出青年科研项目（No2023AH020033）
安徽省转化医学研究院科研基金项目（No2022zhyx-C07）
安徽医科大学科研水平提升计划（No2021xkjT016）
安徽医科大学第三附属医院基础与临床合作研究提升计划（No2022sfy014）
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