换一批
换一批重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白在CHO-S细胞中的表达纯化及功能活性分析
Expression,purification,and functional verification of recombinant human glycoprotein hormone beta 5/alpha 2 fusion protein in CHO-S cells
摘要目的 在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ova-ry cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响.方法 构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,将其瞬时转染CHO-S悬浮细胞中,大量表达纯化并验证rhCGH-CTP蛋白生物学活性;通过干预3T3-L1成熟脂肪细胞24 h,观察细胞内甘油三酯(TG)水平的变化.结果 Western blot结果显示,rhCGH-CTP蛋白在CHO-S细胞中成功表达,表达量可达715.4 mg·L-1;用AKTA pure蛋白纯化系统纯化蛋白,SDS-PAGE方法鉴定纯化出的蛋白纯度较高可达90％.此外,在高表达TSHR基因的成熟脂肪细胞3T3-L1中,利用ELISA试剂盒测定不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预后胞内cAMP含量明显升高,说明rhCGH-CTP蛋白具有生物活性;油红O染色结果发现,与对照组相比,不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预组的成熟脂肪细胞中TG含量明显降低(P＜0.05).结论 成功表达并纯化了 rhCGH-CTP融合蛋白,其具有良好的生物学活性并能有效降低TG,该研究为后续深入揭示CGH蛋白的生理作用及在临床实践中的潜在应用提供了重要基础.
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关键词
重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白真核表达悬浮CHO-S细胞cAMP活性基因工程脂代谢recombinant human glycoprotein hormone beta5/al-pha2 fusion proteineukaryotic expressionsuspension CHO-S cellscAMP activitygenetic engineeringlipid metabolism
栏目名称
DOI
10.12360/CPB202308031
发布时间
2024-03-11
基金项目
国家重点研发计划（No2018YFA0800603）；
广东省重点领域研发计划项目（No2019B020201015）；
广东省珠江人才计划（No2016ZT06Y432）；
国家自然科学基金（No82100064）
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