基于miRNA155-5p介导的MAPK/NF-κB通路探讨尿石素A的抗炎机制

Exploring anti-inflammatory mechanism of urolithin A based on miRNA155-5p-mediated MAPK/NF-κB pathway

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摘要目的以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW264.7炎症细胞模型为研究对象,基于miRNA155-5p调控的 TLR4/MAPK/NF-κB 通路探讨尿石素 A(urolithin A,Uro A)的抗炎机制.方法通过转染过表达miR-155-5p-mimics 及 miR-NC 至 LPS 诱导的 RAW264.7 细胞中,RT-qPCR 法检测各组细胞 miR-15-5p、p38 MAPK、JNK 和 ERK的mRNA表达.MTT法检测Uro A对细胞活力的影响;Griess法检测细胞上清液NO的含量;ELISA法检测细胞上清液 PGE2、IL-6、IL-1β 和 TNF-α 的表达水平;Western blot 法检测iNOS、COX-2、TLR4以及MAPK/NF-κB通路相关蛋白的表达水平.结果与miR-NC组比较,miRNA155-5p过表达组p38 MAPK、JNK和ERK mRNA表达水平明显升高(P＜0.01).与模型组比较,Uro A能明显抑制LPS诱导的miR-NA155-5p、NO、PGE2 和 TNF-α、IL-1β、IL-6(P＜0.01),降低iNOS、COX-2蛋白表达水平(P＜0.01),且呈浓度依赖性;此外,Uro A明显抑制TLR4蛋白的表达水平以及p38 MAPK、JNK、NF-κB p65、IKBα蛋白的磷酸化水平(P＜0.05),并呈浓度依赖性;但对ERK1/2蛋白磷酸化没有显示出明显的抑制作用.结论 Uro A能够明显抑制LPS诱导的炎症反应,机制与miRNA155-5p介导的TLR4/MAPK/NF-κB信号通路有关.