换一批CX3CR1GFP报告基因小鼠的构建、鉴定及效率检测
Construction,identification and efficiency detection of CX3CR1GFP reporter gene mice
摘要目的 基于Cre/Loxp系统构建CX3CR1GFP基因小鼠,并分析CX3CR1GFP表达效率.方法 通过以限制酶为基础的克隆技术设计靶向载体,用线性化的靶向载体转染胚胎干细胞(embryonic stem,ES),将筛出缺失新霉素抗性基因(ne-omycin resistance gene,neo)的重组ES细胞克隆注入囊胚中产生嵌合CX3CR1+/GFP小鼠,与野生型小鼠(wild type mice,WT)交配,反复回交得到CX3CR1GFP/GFP小鼠.分别提取WT和CX3CR1GFP小鼠DNA及mRNA,使用琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型,RT-qPCR检测小鼠不同组织中CX3CR1的表达水平;Western blot分析GFP蛋白对外周血中的单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)及不同组织中CX3CR1的表达;流式细胞术检测骨髓中免疫细胞的标记效率;免疫荧光观察小鼠不同组织中GFP的表达情况.结果 琼脂糖凝胶电泳结果表明,转基因小鼠基因型为CX3CR1GFP/GFP纯合子.RT-qPCR 和 Western blot 结果表明,增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EG-FP)已靶向取代CX3CR1基因,因此在CX3CR1GFp小鼠中CX3CR1表达极低,而GFP表达明显上调;流式细胞术和免疫荧光显示,GFP有效标记CX3CR1GFP小鼠,在不同组织及不同细胞均有表达且表达具有差异.结论 本研究构建并鉴定CX3CR1GFP基因报告小鼠,且GFP在小鼠体内稳定表达.为进一步揭示CX3CR1在免疫调节中的潜在机制研究提供动物模型基础.
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关键词
CX3CR1EGFPCre/Loxp流式细胞术免疫荧光类风湿关节炎CX3CR1EGFPCre/Loxpflow cytometryim-munofluorescencerheumatoid arthritis
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DOI
10.12360/CPB202407056
发布时间
2024-12-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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