m6 A去甲基化酶ALKBH5对高糖诱导心肌成纤维细胞增殖与迁移能力的影响

Effect of m6A demethylase ALKBH5 on proliferation and migration of cardiac fibroblasts induced by high glucose

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摘要目的探究N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6 A)去甲基化酶ALKBH5对高糖诱导心肌成纤维细胞(cardiac fi-broblasts,CFs)增殖与迁移能力的影响.方法解剖消化新生乳鼠的心脏提取原代CFs,在光学显微镜及共聚焦显微镜下鉴定细胞类型.使用高糖培养基(33 mmol·L-1葡萄糖)诱导细胞活化,使用ALKBH5表达载体转染细胞构建ALK-BH5过表达模型.通过免疫荧光染色、Western blot和RT-qPCR检测CFs中去甲基化酶ALKBH5表达变化;Dot blot方法检测m6A水平的变化;Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及纤维化关键指标Ⅰ型胶原的表达变化;EdU染色法检测CFs增殖能力;Tran-swell迁移实验检测CFs的迁移能力.结果在高糖诱导下,CFs中ALKBH5的表达量明显下降,m6A水平明显上升;同时增殖指标PCNA和纤维化指标Ⅰ型胶原的表达量明显升高,细胞增殖和迁移能力明显提升.过表达ALKBH5逆转了上述变化.结论 ALKBH5过表达可抑制PCNA和Ⅰ型胶原的表达,并减弱CFs的增殖和迁移能力,其作用可能与m6A甲基化修饰有关.