基于双光子成像的小鼠脑部神经血管偶联可视化检测
Visual detection of neurovascular coupling in mouse brain based on two-photon imaging
摘要目的 构建活体状态下小鼠脑部神经血管偶联简单、易实操的可视化检测方法.方法 雄性C57BL/6J小鼠脑定位注射pAAV-hSyn-jGCaMP7s-WPRE至桶状皮层用于标记神经元兴奋性,病毒表达3周后对小鼠制备玻璃颅窗,尾静脉注射TRITC-Dextron 155 ku表征血管轮廓与血流速度,通过自制胡须刺激器对小鼠桶状皮层神经元兴奋性进行可控刺激,双光子显微镜下实时监测胡须刺激对神经元活动与血管变化的影响.结果 双光子显微镜观察可见脑内神经元钙离子信号及血浆信号.胡须刺激器可引起桶状皮层神经元钙离子信号明显增强,可有效控制桶状皮层神经元兴奋;神经元兴奋同时血管直径同步扩大,血流速度与血流量随之增加.结论 本研究分别从位置、时相及功能三方面实现了活体状态下小鼠桶状皮层神经血管偶联的可视化检测,本方法简便、易操作,可为神经血管偶联病理机制及相关治疗药物药效的阐明提供有力的研究工具.
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