丹参酮ⅡA调控铜死亡相关蛋白影响脂多糖诱导的H9c2心肌细胞炎症损伤
Tanshinone ⅡA regulates cuproptosis-related proteins and affects lipopolysaccharide-induced inflammatory damage in H9c2 cardiomyocytes
摘要目的 建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的H9c2心肌细胞炎症损伤模型,探讨丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,Tan ⅡA)的抗炎作用及对铜死亡的影响.方法 采用CCK-8法检测细胞活力;RT-qPCR检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白介素-1 β(interleukin-1 beta,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)mRNA 表达水平;比色法检测细胞内亚铜离子(Cu+)含量;通过Western blot和免疫荧光技术检测铜转运蛋白1(copper transporter 1,CTR1)、铁氧还蛋白1(ferredoxin 1,FDX1)、二氢硫辛酰胺乙酰转移酶(dihydrolipoamide S-acetyltransferase,DLAT)、丙酮酸脱氢酶 E1α1 亚基(pyruvate dehydrogenase E1 Alpha 1,PDHα1)的表达.结果 Tan ⅡA可明显抑制促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,减少细胞内Cu+异常蓄积,并能逆转LPS联合铜离子载体Elesclomol-Cu(Ⅱ)加剧的炎症反应及Cu+水平升高.此外,Tan ⅡA明显下调铜死亡相关蛋白 CTR1、FDX1、DLAT、PDHα1 的表达.结论 Tan ⅡA可通过调控细胞内Cu+含量及铜死亡相关蛋白表达,减轻LPS诱导的H9c2心肌细胞炎症损伤.
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