摘要目的 观察猪苓多糖(PPS)对小鼠腹腔巨噬细胞的活化作用,并研究Toll样受体4(TLR4)在其中的作用.方法 用PES 12.5,25,50及100 mg·L-1刺激C3H/HeN小鼠和TLR4缺陷的C3H/HeJ小鼠脾细胞72 h或腹腔巨噬细胞24 h,以[3H]TdR掺入法检测脾细胞增殖反应;以Griess法测定腹腔巨噬细胞培养上清一氧化氮(NO)水平,ELISA检测白细胞介素1 β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;以溴化氰活化多糖的方法制备荧光胺(Flu)标记的PE5(Flu-PPS)及FLu-葡聚糖,应用流式细胞仪及激光共聚焦显微镜检测Flu-PPS与小鼠腹腔巨噬细胞的结合.结果 PPS可明显促进C3H/HeN小鼠脾细胞增殖并诱导腹腔巨噬细胞分泌NO,IL-1β和TNF-α,且具有浓度依赖性(r=0.999,P＜0.01).用抗TLR4单抗20 mg·L-1与C3H/HeN小鼠腹腔巨噬细胞预孵育1 h后加入PPS 50 mg·L-1,与单独PPS 50 mg·L-1孵育比较,巨噬细胞培养上清IL-1β和TNF-α浓度分别由(0.38±0.06)μg·L-1和(0.29±0.05)μg·L-1降至(0.18±0.01)μg·L-1和(0.12±0.02)μg·L-1,降幅达52.6%和58.6%(P＜0.01).PPS对C3H/HeN小鼠的脾细胞增殖、腹腔巨噬细胞产生IL-1β和TNF-α的作用明显强于C3H/HeJ小鼠:PPS 12.5～100 mg·L-1组脾细胞增殖分别增加了2.4,1.7,1.5和22.2倍,IL-1β增加了0.9,1.3,1.2和1.1倍,TNF-α增加了1.3,0.9,0.6和0.6倍,差异均有统计学意义(P＜0.01).流式细胞仪及激光共聚焦显微镜分析结果表明,Flu-PES 1 mg·L-1 与小鼠腹腔巨噬细胞结合的荧光强度显著高于Flu-葡聚糖,增加Flu-PPS浓度至5 mg·L-1,荧光强度并未相应增强,表明Flu-PPS与小鼠腹腔巨噬细胞的结合具有饱和性;未标记的PPS 100 mg·L-1及抗TLR4单抗200mg·L-1可明显阻断Flu-PPS与巨噬细胞的结合.结论 PPS可能通过TLR4活化小鼠腹腔巨噬细胞.