换一批反式激活蛋白-氧依赖性降解结构融合结构域介导蛋白跨膜转运和氧依赖性降解作用
Transmembrane delivery and oxygen-dependent degradation mediated by trans-activator-oxygen-dependent degradation fused motif
摘要目的 研究反式激活蛋白(TAT)蛋白转导结构域介导的融合蛋白的跨膜转运,以及氧依赖性降解(ODD)结构域介导融合蛋白在体内外不同氧分压环境中的降解作用.方法 将TAT,ODD以及增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列进行融合,构建了TAT-ODD-EGFP融合蛋白基因.将该序列克隆到原核表达载体pET28a中,在BL21工程菌中进行表达,通过亲和柱层析法纯化,得到高纯度的融合蛋白.同方法制备EGFP和TAT-EGFP融合蛋白作为对照.在20% O2和1%O2将融合蛋白与A549,H1299和MDA-MB-231细胞系孵育,荧光显微镜下观察融合蛋白在细胞中的分布以及稳定性.小鼠尾静脉注射不同融合蛋白( 10 mg·kg-1),分别在注射后1,6和12 h处死动物,取脏器在荧光显微镜下观察融合蛋白的分布及稳定性.结果 由于EGFP相对分子质量大,无法穿透细胞及组织.TAT可以有效地介导TAT-EGFP进入细胞和动物实体组织,其稳定性不受细胞或组织中氧分压的影响,而TAT-ODD-EGFP进入细胞或组织后,在20% O2条件下迅速降解,但可稳定存在于1% O2细胞及组织中.结论 TAT可以有效地转导融合蛋白穿过细胞膜.引入ODD,20%O2下融合蛋白TAT-ODD-EGFP迅速降解,但可以稳定存在于1% O2细胞和组织中,说明TAT-ODD可以转导蛋白进入并靶向存在于低氧的肿瘤组织中.
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分类号
Q71（生物大分子的结构和功能）
栏目名称
DOI
10.3867/j.issn.1000-3002.2011.05.007
发布时间
2011-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30973562）
国家重点基础研究发展计划（973计划）（2010CB933904）
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