换一批mTEL-cFms激酶结构域融合蛋白真核表达载体的构建及其对信号转导和转录激活因子核转位的影响
Establishment of mTEL-cFmskd eukaryotic expression vector and its effect on STAT1/3 nuclear translocation
摘要目的 构建激酶盘真核表达载体,观察豆蔻酰化的TEL转录调节因子HLH结构域与c-Fms激酶结构域融合蛋白( mTEL-cFmskd)的表达对信号转导和转录激活因子1(STAT1)和STAT3核转位的影响.方法 利用DNA重组技术,将人的c-Src豆蔻酰化多肽、TEL转录调节因子HLH结构域、c-Fms激酶结构域以及c-Myc标签的DNA序列克隆在pCORON/neo载体上,构建pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体.将载体转染至稳定表达GFP-STAT1的人骨肉瘤细胞(U2OS)和稳定表达EGFP-STAT3的幼仓鼠肾细胞24 h后,采用IN Cell Analyzer1000获取细胞图像,分析细胞内GFP-STAT1或EGFP-STAT3融合蛋白的核转位程度.结果 质粒酶切和测序鉴定表明,构建的pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体序列正确.载体转染细胞24 h后,绿色荧光蛋白标记的STAT1和STAT3均进入细胞核,发生核转位现象.c-Fms激酶抑制剂GW2580和Sutent能抑制mTEL-cFmskd诱导EGFP-STAT3核转位的发生.结论 成功构建激酶盘真核表达载体pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc.载体在细胞中表达的mTEL-cFmskd豆蔻酰化融合蛋白具有M-CSF/c-Fms配体受体复合物激活下游信号分子的生物学功能.
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医学主题词
转录激活(Transcriptional Activation)蛋白(Egg White)细胞(Cells)受体, 巨噬细胞集落刺激因子(Receptor, Macrophage Colony-Stimulating Factor)人(Persons)
栏目名称
DOI
10.3867/j.issn.1000-3002.2011.05.008
发布时间
2011-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
重大新药创制专项（(2009 ZX09501-031)）
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