摘要目的 建立RNR2调控的酵母增强绿色荧光蛋白(yEGFP)发光酵母细胞,高通量筛选化学诱变原.方法 用PCR方法从酵母(W303-1 A)基因组扩增RNR2启动子,经酶切后,用T4连接酶与线性化的含酵母嗜好遗传密码子的yEGFP报告载体相连,连接产物转化子质粒经酶切和测序鉴定,构建RNR2调控的yEGFP酵母报告载体.用醋酸锂方法将其转化于W303-1 A酵母细胞,从而构建成RNR2调控的yEGFP发光酵母细胞(W303-1 A/RNR2-yEGFP).用甲磺酸甲酯0～400 mg· L-1分别作用于该发光酵母细胞0,4,8,12,16和20 h后,于倒置荧光显微镜下观察荧光,用多功能酶标仪检测其荧光发光强度,选择最佳诱导时间；用不同浓度的DNA烷化剂、DNA断裂剂和DNA合成酶抑制剂作用于该重组细胞16h,检测其荧光发光强度,考察W303-1 A/RNR2-yEGFP细胞对各种化学诱变原的敏感性.结果 经测序确定W303-1 A/RNR2-yEGFP构建成功.选择16 h为最佳诱导时间；各种化学诱变原与W303-1 A/RNR2-yEGFP细胞作用16h后,与DNA发生结合的化合物中放线菌素D和溴乙锭诱导的发光度与对照组无明显差别,发光倍数＜1.5；与DNA发生烷基化的化合物中,甲磺酸甲脂200 mg· L-1诱导的细胞发光度最强,发光倍数为5.21,瘤可宁200 μg· L-1诱导的发光倍数为1.9,而丝裂霉素C的发光度与对照组无明显差别.在使DNA发生断裂的诱变原中,顺铂250 mg· L-1诱导的细胞最高发光倍数为3.7,其次4-硝基-N-氧化喹啉3.1 mg·L-1、博来霉素12.5 mg·L-1和福来霉素200 mg· L-1,最高诱导倍数分别为2.35,2.26和2.53;在抑制DNA合成酶或拓扑异构酶的诱变原中,5-氟尿嘧啶500 μg· L-1、羟基脲570.45 mg· L-1和喜树碱30 mg,L-1所诱导的细胞最大发光倍数分别为2.36,2.65和2.53;而非基因毒性化合物秋水仙碱、刀豆氨酸和四环素诱导的发光度与对照无明显差别.结论 该重组发光酵母细胞可用于对多数造成DNA断裂或合成阻断的化学诱变原筛选,具有快速、方便和高通量等特点.