异鼠李素和阿魏酸在大鼠原代肝细胞的肝摄取性质

Uptake characterizations of isorhamnetin and ferulic acid in rat primary hepatocytes

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摘要目的建立大鼠原代肝细胞摄取模型,评价异鼠李素和阿魏酸的肝细胞摄取性质.方法应用RT-qPCR技术测定0,0.5,2和4h悬浮培养原代大鼠肝细胞上摄取转运体有机阴离子转运多肽(Oatp)1和Oatp2,有机阴离子转运体(Oat)2和有机阳离子转运体(Oct)1的mRNA表达.应用已知底物非索非那定、普伐他汀、甲氨蝶呤和阿昔洛韦评价转运体的功能.将已知底物或受试药物在4℃和37℃分别与肝细胞孵育不同时间,LC-MS/MS定量测定细胞摄取量,考察温度和时间对底物摄取的影响.由浓度依赖的摄取实验,计算得到Km、Vmax和主动摄取率等参数.在肝细胞模型上,将转运体的阳性抑制剂与异鼠李素10 μmol·L-1和阿魏酸50 μmol· L-1共孵育2 min,观察抑制剂对受试药转运的影响.结果悬浮培养大鼠原代肝细胞上表达有转运体Oatp1,Oatp2,Oat2和Oct1,并能介导已知底物的主动摄取.转运体的mRNA表达水平随着时间的延长而快速下降,4h的表达水平约为0h的10％.转运体对已知底物摄取活性也随时间呈下降趋势,但程度显著低于表达水平,4h的活性约为0h的28.7％～71.4％.在经验证的肝细胞模型上,异鼠李素的4℃和37℃摄取无显著差异,主动转运率为14.6％.阿魏酸在37℃的摄取量显著高于4℃,主动转运率为84.1％；Oct阳性抑制剂奎尼丁100 μmol· L-1能显著抑制阿魏酸的肝摄取,抑制率为64.9％.结论成功建立了大鼠原代肝细胞摄取模型,并用底物进行了验证.异鼠李素通过被动扩散进入肝细胞,阿魏酸的肝细胞摄取则以主动转运为主.