换一批肿瘤相关蛋白spindlin 1的表达、纯化及多克隆抗体的制备
Expression and purification of spindlin 1,a novel cancer related protein,and preparation of its polyclonal antibody
摘要目的：制备spindlin 1蛋白的多克隆抗体，为spindlin 1的功能研究和肿瘤筛查奠定基础。方法spindlin 1-谷胱甘肽S转移酶融合蛋白（spindlin 1-GST）在大肠杆菌中表达，切除 GST 后，将纯化的spindlin 1蛋白免疫家兔，制备多克隆抗体。Hitrap Protein A柱纯化spindlin 1抗血清，ELISA测定抗体效价。用Western蛋白质印迹法和免疫组化方法检测抗体的特异性。结果 ELISA检测结果表明，纯化的spindlin 1多克隆抗体效价为1∶2000。Western 蛋白质印迹法实验结果表明，纯化的spindlin 1多克隆抗体能够与转染pAdeasy-myc-spindlin 1载体的HeLa细胞抽提物中spindlin 1蛋白结合，与Myc抗体检测位置一致。免疫组化结果表明，转染增强型绿色荧蛋白（EGFP）和spindlin 1（pEGFP-C3-spindlin 1）的 HeLa细胞发绿色荧光，其细胞核中有spindlin 1蛋白表达。且spindlin 1多克隆抗体能够特异性识别卵巢癌组织中的spindlin 1蛋白。结论成功制备肿瘤相关蛋白spindlin 1的多克隆抗体，能够特异性检测细胞和组织中spindlin 1蛋白表达。
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分类号
R392.11（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.3867/j.issn.1000-3002.2014.03.002
发布时间
2014-07-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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