神经前体细胞表达下调因子8类泛素修饰抑制因子MLN4924对单核巨噬细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响

Effect of neddylation inhibitor MLN4924 on proliferation and apoptosis of mononuclear macrophage leukemia cells

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摘要目的观察神经前体细胞表达下调因子8(NEDD8)类泛素修饰抑制因子MLN4924对单核巨噬细胞白血病细胞增殖的影响,并探讨其作用机制.方法 MLN4924 0.25 ～4.0 iμmol·L-1与U937细胞、THP-1细胞、Mo7e细胞和RAW264.7细胞作用24 h,采用MTT法检测细胞存活.MLN4924 0.25～8.0 μmol·L-1与RAW264.7细胞作用24 h,用Western蛋白质印迹法检测NEDD8类泛素化修饰的主要底物cullin蛋白表达水平.MLN4924 0.5 μmol·L-1作用于RAW264.7细胞24 h,用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率.结果 MLN4924 0.25～4.0 μmol· L-1作用24 h对RAW264.7细胞、U937细胞、THP-1细胞和Mo7e细胞增殖具有抑制作用,IC50分别为0.52,3.11,2.89和0.76 μmol· L-1;对正常小鼠骨髓巨噬细胞增殖无明显影响.MLN4924 0.25～8.0 μmol· L-1作用24 h,NEDD8类泛素化修饰的cullin蛋白表达减少(P＜0.01),表明RAW264.7细胞NEDD8修饰逐渐减少.MLN4924 0.5,1.0和2.0 μmol· L-1作用于RAW264.7细胞24 h,G0/G1期细胞百分率由正常对照组的(61.3±1.3)％分别升高到(64.5±1.5)％(P＜0.05),(69.5±2.3)％(P＜0.01)和(72.8±1.7)％(P＜0.01),细胞凋亡率由正常对照组的(1.5±0.3)％分别升高到(2.3±0.5)％,(4.3±0.9)％(P＜0.05)和(7.5±0.8)％(P＜0.01).结论 MLN4924能够明显抑制单核巨噬细胞白血病细胞增殖,并诱导其细胞周期阻滞和细胞凋亡.