换一批基于荧光共振能量转移法建立筛选β分泌酶抑制剂的适用性评价方法
Evaluation method for compatibility of compounds in fluorescence resonance energy transfer model to screen β-secretase inhibitors
摘要目的 建立一种基于荧光共振能量转移(FRET)法筛选β分泌酶(BACE1)抑制剂的适用性评价方法.方法 选取2种基于FRET方法建立的商品化BACE1活性测定体系,按照标准流程检验表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)和Compound 1对于BACE1的抑制活性,计算抑制剂在2个测定体系中的抑制率和催化曲线斜率,同时定量计算化合物加入对测定体系荧光强度的影响,并进行对比评价.结果 曾报道的BACE1抑制剂EGCG加入基于FRET方法的测定体系后,导致体系荧光强度降低,且荧光强度降低得到的直线斜率(10.8±2.6)与抑制曲线斜率(10.2±3.4)数据一致,证明EGCG对BACE1的抑制活性为假阳性;而Compound 1加入对于体系荧光强度无影响,证实了其对BACE1的抑制活性.在基于FRET方法的测定体系中初筛显示阳性的化合物,其对测定体系荧光强度的影响与未加入BACE1的空白对照进行校正,评价待测化合物在所选测定体系中的适用性,避免出现假阳性结果.结论 采用此化合物空白荧光校正方法可定量测定被测化合物对于体系荧光强度的影响,从而评价BACE1抑制剂在FRET体系中的适用性.
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关键词
荧光共振能量转移β分泌酶荧光强度表没食子儿茶素-3-没食子酸酯fluorescence resonance energy transferβ-secretasefluorescence intensity(-)-epigallocatechin-3-gallate
医学主题词
荧光(Fluorescence)荧光共振能量转移(Fluorescence Resonance Energy Transfer)方法(Methods)性(Sex)儿茶素(Catechin)
分类号
R963（药理学）
栏目名称
DOI
10.3867/j.issn.1000-3002.2018.05.004
发布时间
2018-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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