3种肝源永生化细胞药物代谢酶表达差异比较研究

Comparative study of cytochrome P450 expression in three permanent human hepatocytes

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摘要目的比较3种人源肝永生化细胞LX-2,L02和HepG2药物代谢酶的表达差异,确定适合于特定细胞色素P450(CYP)亚型研究的细胞类型.方法体外培养人源传代肝细胞L02,LX-2和HepG2,以奥美拉唑(Ome)、地塞米松(Dex)、苯巴比妥钠(Phe)、异烟肼(Iso)和利福平(Rif)0,5,10,20和40 μmol·L-1进行诱导.CCK-8法检测细胞存活,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测LX-2细胞中CYP1A2,CYP2B6, CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1和CYP3A4基因表达水平;Western印迹法检测LX-2,L02和HepG2细胞中以上7种CYP亚型蛋白表达水平;LX-2,L02和HepG2经Rif 5,10,20和40 μmol·L-1诱导后, Luciferin-PFBE法检测细胞中CYP3A4酶活性变化.结果 CCK-8结果显示,与相应细胞对照组相比, Ome,Dex,Phe,Iso和Rif(≤40 μmol·L-1)作用于LX-2,L02和HepG2细胞24 h,细胞存活率均＞80%;RT-qPCR法检测结果显示,与LX-2细胞对照组相比,Phe诱导CYP2B6(P＜0.05)和CYP2D6(P＜0.01)表达上升;Western蛋白印迹结果显示,L02,LX-2和HepG2细胞经Ome,Dex,Phe,Iso和Rif 40 μmol·L-1处理后,CYP1A2,CYP2B6,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1和CYP3A4蛋白表达存在差异.L02细胞中CYP2C9(IA=1.58 ± 0.07),CYP2C19(IA=0.96 ± 0.02)和CYP3A4(IA=1.30 ± 0.01),LX-2细胞中CYP2B6(IA=1.48 ± 0.01)和CYP2D6(IA=1.46 ± 0.02),HepG2细胞中的CYP1A2(IA=1.62 ± 0.19)和CYP2E1(IA=1.49±0.10)分别具有最高的表达丰度.CYP3A4酶活性检测显示,Rif处理L02,LX-2和HepG2细胞24 h后,CYP3A4活性变化无统计学差异.结论 L02,LX-2和HepG2细胞中CYP亚型蛋白表达丰度差异提示,L02细胞适用于CYP2C9,CYP2C19和CYP3A4实验;LX-2细胞适用于CYP2B6和CYP2D6实验;HepG2细胞适用于CYP1A2和CYP2E1实验.