换一批
换一批免疫磁珠法结合条件培养基进行低密度条件下的神经元原代培养
Primary culture of neurons under low density conditions by immunomagnetic beads method combined with conditioned medium
摘要目的 利用免疫磁珠(IMB)细胞分选技术结合星形胶质细胞条件培养基(A-CM)进行低密度条件下原代神经元培养.方法 取新生(24 h)内昆明小鼠取大脑半球,通过机械分离与胰酶消化制备细胞悬液进行原代培养.培养10 d后,利用恒温振荡法去除小胶质细胞等杂细胞,抗胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)抗体免疫荧光染色鉴定星形胶质细胞纯度.利用达到纯度要求的细胞培养物制备A-CM.分别取新生(24 h)内昆明小鼠大脑皮质和海马,通过机械分离与胰酶消化制备细胞悬液,经IMB细胞分选获得高纯度神经元,加入A-CM进行低密度条件下神经元的原代培养.观察培养过程中神经元的形态学指标,以抗160 ku神经丝抗体免疫荧光染色鉴定神经元纯度.结果 细胞免疫荧光染色鉴定星形胶质细胞的纯度>95％.小鼠皮质和海马神经元形态学观察与细胞免疫荧光染色结果表明,神经元在低密度培养条件下生长良好,不同发育阶段的形态学特征明显,纯度较高.结论 低密度条件下成功培养了小鼠大脑皮质和海马原代神经元.
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