六价铬通过上调SUMO特异性蛋白酶家族分子表达增强雄激素受体的转录活性

ChromiumⅥenhances transcriptional activity of androgen receptor by upregulating SUMO-specific protease family

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摘要目的研究六价铬对雄激素受体(AR)转录活性的影响及其与小泛素类似修饰物特异性蛋白酶(SENP)家族分子的相关性.方法 ①293T细胞经K2CrO40.25,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0和16.0μmol·L-1处理24 h,LNCaP细胞经K2CrO40.25,0.5,1.0,2.0,4.0,10.0和20.0μmol·L-1处理24 h,用MTT法检测细胞存活率并计算半数抑制浓度(IC50)值;②将带有荧光素酶报告基因的表达雄激素反应元件的质粒和表达AR的质粒共转染293T细胞,将带有荧光素酶报告基因的表达雄激素反应元件的质粒转染LNCaP细胞,分别用K2CrO40.25,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0和16.0μmol·L-1处理24 h,用双荧光素酶报告基因检测系统分析外源性和内源性AR的转录活性.③取对数生长期LNCaP细胞,以K2CrO40.5,2.0和8.0μmol·L-1处理24 h,用逆转录PCR法检测AR和SENP家族分子SENP1,SENP2,SENP3,SENP5,SENP6,SENP7和SENP8 mRNA水平,Western印迹法检测AR,SENP1和SENP3蛋白水平.结果 ①与细胞对照组相比,K2CrO4浓度≥1.0μmol·L-1时293T细胞存活率显著降低(P<0.01),K2CrO4浓度≥2.0μmol·L-1时LNCaP细胞存活率明显降低(P<0.01).②与细胞对照组相比,K2CrO4浓度≥1.0μmol·L-1时293T细胞中外源性AR的转录活性显著增强(P<0.05),K2CrO44.0和8.0μmol·L-1明显增强LNCaP细胞中内源性AR转录活性(P<0.05).③与细胞对照组相比,K2CrO40.5,2.0和8.0μmol·L-1均不改变LNCaP细胞中AR mRNA和蛋白水平,而K2CrO42.0和8.0μmol·L-1组SENP1 mRNA水平显著增加(P<0.05),K2CrO40.5,2.0和8.0μmol·L-1组SENP3 mRNA水平显著增加(P<0.05).与细胞对照组相比,K2CrO48.0μmol·L-1组SENP1蛋白水平显著增加(P<0.01),K2CrO42.0和8.0μmol·L-1组SENP3蛋白水平显著增加(P<0.05).结论 K2CrO4可能通过上调SENP1和SENP3表达而增强AR转录活性.