摘要目的 探究大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(EG)与去甲斑蝥素(NCTD)联用的抗肿瘤作用及机制.方法 ①EG和NCTD与人肝癌HepG2细胞和人肺癌A549细胞作用48 h.给药方案:EG和NCTD分别单用(终浓度均为60～960 μmol·L-1)、同时联用(EG+NCTD,1∶1同时给药,终浓度分别为30～480 μmol·L-1)、序贯联用方案Ⅰ(EG→NCTD,EG作用 24h后除去EG,加入NCTD继续作用 24 h,终浓度均为60～960 μmol·L-1)和序贯联用方案Ⅱ(NCTD→EG,NCTD作用24h后除去NCTD,加入EG继续作用24 h,终浓度均为60～960 μmol·L-1).MTT法检测细胞存活率,并计算相应的联合指数(CI)值,判断药物联合作用效应.随后利用反向找靶技术并构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络筛选两药联用潜在的关键靶点.流式细胞术分析EG和NCTD单用及NCTD→EG序贯联用对HepG2和A549细胞凋亡的影响,Western印迹法检测胱天蛋白酶3(CASP3)和活化CASP3蛋白表达.②建立肝癌H22移植瘤小鼠模型,设模型对照(给予PBS)、5-氟脲嘧啶(5-Fu)阳性对照(30 mg·kg-1)、EG单用(4 mg·kg-1)、NCTD单用(4 mg·kg-1)、两药同时联用(EG+NCTD,各 2 mg·kg-1)及序贯联用(NCTD→EG,NCTD 4 mg·kg-16 d,EG 4 mg·kg-16 d)组,均ip给药,每天1次,共12 d.末次给药后24h小鼠称重后处死,剥离移植瘤组织称重,计算肿瘤抑制率.结果 ①EG和NCTD单用、同时联用及2种方案序贯联用均呈浓度依赖性抑制HepG2和A549细胞存活(P<0.01),在一定浓度范围内具有协同作用.EG和NCTD单用及同时联用三者比较,NCTD单用IC50最低,同时联用未表现出更好的作用.与两者单用比较,NCTD→EG序贯联用IC50最低.基于反向找靶及PPI分析筛选出关键靶点CASP3,表明两药联用可能涉及细胞凋亡通路.流式细胞术和Western印迹实验结果表明,与EG和NCTD单用组相比,NCTD→EG序贯联用明显增加HepG2和A549细胞凋亡率(P<0.01),且活化CASP3蛋白表达增加(P<0.01),而CASP3蛋白表达无明显变化.②肝癌H22移植瘤模型小鼠体内实验结果表明,与模型对照组相比,NCTD单用、同时联用、NCTD→EG序贯联用和5-Fu阳性对照组瘤重均显著降低(P<0.05),抑瘤率分别为42.4%,47.8%,50.4%和69.0%;EG单用抑瘤作用不明显.同时联用组小鼠体重较模型对照组升高(P<0.05),5-Fu组显著降低(P<0.01).结论 EG与NCTD联用具有协同抗肿瘤作用,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关.