换一批
换一批摘要目的 建立一种简单易行的高纯度原代皮质神经元长期培养方法.方法 取胎龄为16～18 d的SD胎鼠,分离皮质并剪碎,经胰酶消化、吹打、计数后,接种于PDL包被的培养板上,6 h后换为维持培养基进行培养,每5d半量换液,培养至第7,14和21d时,采用NSE和GFAP荧光染色鉴定神经元纯度.实验过程中主要摸索了以下几个条件:胰酶溶液、细胞接种密度、维持培养基和胶质细胞增殖抑制剂添加时间.结果 优化后的神经元培养条件为:使用含EDTA的0.0625%胰蛋白酶进行消化;以40000 cm-2密度接种;以Neurobasal Plus培养基作为维持培养基;培养至第6小时到第5天时,给予10 μmol·L-1 5-氟尿嘧啶和尿嘧啶.采用上述条件培养的神经元可以达到在体外健康生长至3周以上,纯度＞90%.结论 本文以SD胎鼠皮质为样本建立了简便的高质量神经元长期培养方法.
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