摘要目的 考察维生素K3对人肝来源的黄嘌呤氧化酶(XO)的激活作用及其作用机制.方法 以人肝S9(0.1 g·L-1)作为XO来源,分别与底物黄嘌呤(0,2,4,8和16 μmol·L-1)在37℃孵育90 min,液相色谱二极管阵列法测定反应的米氏常数(Km).黄嘌呤在Km浓度下,三点法(维生素K3 1,10和100 μmol·L-1)检测维生素K3激活剂的活性,多点法(维生素K3 1,2,5,10,20,50,100,200和400 μmol·L-1)测定其激活XO的半数有效浓度(EC50).使用1/2EC50,EC50和2EC50维生素K3进行动力学参数(Km和Vmax)的测定和双倒数曲线的拟合,考察不同浓度维生素K3存在下的动力学行为变化,并分析其激活类型.最后,通过分子对接技术探究XO与维生素K3之间的互作机制.结果 XO介导黄嘌呤氧化反应的Km为4.71 μmol·L-1.作为该反应的激活剂,维生素K3 浓度依赖性激活XO(logistic拟合公式y=A2+(A1-A2)/1+(x/x0)^p),且EC50 为32.0 μmol·L-1.反应的动力学参数在加入维生素K3后发生变化,Km值随维生素K3浓度增加而减小(4.71～1.34 μmol·L-1),而Vmax值随维生素K3浓度增加而增加(0.08～1.31 μmol·min-1·g-1),最终导致Vmax/Km增加(17.0～977.6 mL·min-1·g-1).此外,双倒数曲线拟合表明维生素K3对XO的激活类型为混合型.分子对接结果显示,维生素K3结合于XO的钼喋呤结构域,与Arg599和Ser605形成氢键相互作用.结论 维生素K3是XO的激活剂,可与XO结构域中的Arg599和Ser605形成氢键,调节其与底物黄嘌呤的亲和力,达到激活XO而升尿酸的效果.