摘要目的 探讨环鸟苷酸-腺苷酸合酶(cGAS)抑制剂RU.521对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞极化和胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠的影响及机制.方法 ① 细胞实验:将RAW264.7细胞分为细胞对照组、LPS组、LPS+RU.521 0.75、1.5、3.0 μmol·L-1组和LPS+托法替尼100 nmol·L-1组.除对照组外,其余各组均加入LPS 100 μg·L-1刺激,并同时给予相应药物处理24 h.Western印迹法测定细胞cGAS水平,以筛选RU.521显著抑制LPS诱导cGAS表达的浓度.实时定量qPCR检测细胞胞质mtDNA水平和cGAS mRNA表达;流式细胞术和免疫荧光检测活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位;免疫荧光检测分化簇86(CD86)表达;RT-qPCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA水平;流式细胞术分析M1/M2型巨噬细胞比值以评估巨噬细胞表型;Western印迹法检测cGAS、iNOS、精氨酸酶1(Arg-1)、PTEN诱导激酶1(PINK1)、泛素结合蛋白(p62)、E3泛素连接酶(Parkin)及微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)等自噬相关蛋白,以及Janus激酶1(JAK1)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)通路相关蛋白的表达.② 动物实验:将小鼠分为正常对照组、模型组、模型+RU.521组和模型+托法替尼组.除正常对照组外,其余组于第0和21天尾根及背部皮内注射鸡Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂的乳剂.第28天以模型组平均关节炎评分显著高于正常对照组为造模成功.自第29天起,模型+RU.521组每2dip给予RU.521 5 mg·kg-1,模型+托法替尼组每日ig给予托法替尼10 mg·kg-1,持续4周.定期监测小鼠关节炎评分、足爪肿胀及体重;第66天取关节组织行HE染色观察膝关节组织病理学变化,并分离腹腔巨噬细胞,RT-qPCR检测cGAS、TNF-α和IL-6 mRNA表达;流式细胞术分析M1型巨噬细胞比例;Western印迹法检测 JAK1/STAT3蛋白磷酸化水平.结果 ① 细胞实验:与细胞对照组相比,LPS组胞质mtDNA水平、cGAS mRNA 表达水平和 ROS 水平升高,线粒体膜电位降低;CD86、iNOS 及iNOS、IL-6、TNF-α mRNA 表达升高,Arg-1表达降低,M1/M2比例升高;cGAS、Parkin、PINK1及p62表达上调,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低,JAK1/STAT3通路被激活.与LPS组相比,RU.521抑制cGAS表达,降低ROS水平,恢复线粒体膜电位,下调CD86、iNOS、IL-6和TNF-α表达,上调Arg-1,降低M1/M2,抑制cGAS及PINK1、p62、Parkin表达,恢复LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,并抑制JAK1和STAT3磷酸化激活.② 动物实验:与正常对照组比较,模型组小鼠膝关节炎评分显著升高,腹腔巨噬细胞cGAS、TNF-α和IL-6 mRNA表达水平显著升高、M1型细胞比例显著增加,JAK1/STAT3磷酸化水平显著升高;与模型组比较,RU.521可减轻膝关节损伤,降低腹腔巨噬细胞中cGAS、TNF-α和IL-6 mRNA表达水平及M1型细胞比例,并抑制JAK1/STAT3通路磷酸化.结论 RU.521通过调控JAK1/STAT3信号通路,抑制巨噬细胞M1型极化,缓解小鼠CIA.