摘要目的 提取并分析莱菔子外泌体样纳米颗粒(SRENs)的活性组分,探究其在Caco-2单层细胞中的抗炎活性.方法 采用超速离心结合蔗糖密度梯度离心的方法,从莱菔子中分离并纯化SRENs,采用透射电镜成像表征形态特征,采用纳米颗粒追踪分析表征其平均粒径和ζ电位.采用液相色谱串联质谱技术分析SRENs脂质组分和蛋白质组分;采用RNA转录组测序技术鉴定SRENs中微小RNA(miRNA)的序列.将Caco-2细胞分为6组:对照组(PBS)和SRENs 1、10、20、40、80 mg·L-1组,孵育24 h后计算细胞存活率.将Caco-2单层肠上皮细胞分为7组:对照组(PBS)、脂多糖(LPS)1 mg·L-1组和LPS+SRENs 1、10、20、40、80 mg·L-1组(加入LPS 1 mg·L-1后分别加入相应浓度的SRENs),孵育24 h后计算细胞存活率.将Caco-2细胞与PKH67标记的SRENs 10 mg·L-1共孵育,分别在0、0.5、1、2、3、4和6h通过荧光显微镜观察细胞对SRENs的摄取情况.Caco-2单层细胞分为5组:对照组(PBS)、LPS1 mg·L-1组和LPS+SRENs 1、5、10 mg·L-1组(加入SRENs培养24 h后,加入LPS 1 mg·L-1继续培养24 h),收集上清液,采用一氧化氮(NO)试剂盒测定NO浓度,采用ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和γ干扰素(IFN-γ)水平;取基底侧溶液,采用酶标仪检测荧光强度计算表观渗透系数(Papp);用碱性磷酸酶(AKP)试剂盒测定细胞内AKP的比活力;采用Western印迹法测定细胞中闭锁蛋白(Occludin)、闭合蛋白1(Claudin-1)和紧密连接蛋白1(ZO-1)表达水平.Caco-2细胞分为6组:对照组(PBS)、SRENs 5 mg·L-1组、LPS 1 mg·L-1 组、LPS 1 mg·L-1+SRENs 5 mg·L-1 组、LPS 1 mg·L-1+SRENs 5 mg·L-1+Toll样受体4(TLR4)抑制剂瑞沙托维(TAK-242)1 μmol·L-1组和LPS 1 mg·L-1+TAK-242 1 μmol·L-1组,TAK-242处理组先用TAK-242预处理1h后加入LPS和SRENs,孵育24 h后Western印迹法测定细胞中TLR4、Occludin和IL-6水平.结果 SRENs为纳米级杯状囊泡,平均粒径为(112.64±29.52)nm,ζ电位为(-10.41±0.64)mV,其内部含有33种脂质、330种蛋白质和298种miRNA;在所有脂质组分中,脂肪酸含量最高.SRENs无明显细胞毒性,在6h内可被Caco-2细胞有效摄取.与LPS组相比,SRENs 1、5、10 mg·L-1处理可显著降低细胞Papp,降低细胞内NO生成,增加AKP比活力;SRENs 5、10 mg·L-1处理显著降低IL-6、TNF-α、IL-1β及IFN-γ水平,显著提高Occludin、Claudin-1和ZO-1的蛋白水平.与LPS组相比,LPS+TAK-242组TLR4和IL-6蛋白表达显著降低,Occludin表达升高;与LPS+TAK-242组相比,LPS+SRENs+TAK-242组Occludin蛋白和IL-6水平无显著变化.结论 SRENs具有良好的生物相容性,可修复肠道屏障损伤,其抗炎活性可能与其抑制TLR4信号通路相关.