甘蓝型油菜BnADC基因的克隆及原核表达

Cloning and prokaryotic expression of BnADC gene from Brassica napus L

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摘要利用同源克隆和RACE(Rapid amplification of cDNA ends)技术从甘蓝型油菜中克隆到精氨酸脱羧酶( Arginine decarboxylase,ADC)基因cDNA全长序列,命名为BnADC.BnADC全长为2 649bp,包含344bp的5 '非翻译区(5 ' Untranslated region,5'-UTR)、226bp的3 '非翻译区(3'Untranslated region,3'- UTR)和2 079bp的完整开放阅读框(open reading frame,ORF),编码75.1kD的蛋白质.5'- UTR中含有12bp的uORF(Upstream open reading frame),编码MIRE 4个氨基酸.氨基酸同源性比对表明,BnADC蛋白与其他植物ADC蛋白具有很高的相似性,与芥菜的同源性高达93％；系统进化树分析表明,BnADC与芥菜、拟南芥的ADC亲缘关系较近.在获得全长cDNA的基础上,构建融合表达载体pET30a(+)- BnADC,转化大肠杆菌(Escherichia coli表达菌株BL21( DE3),SDS -PAGE检测到一个约81.1kD的融合蛋白被E.coil表达,且融合蛋白主要存在于菌体沉淀中.

作者洪林 ^[1] 闫晓红 ^[2] 袁亚宾 ^[2] 刘王辉 ^[2] 胡长清 ^[2] 李晨 ^[2] 陈春丽 ^[3] 魏文辉 ^[2] 学术成果认领

作者单位 农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室,中国农业科学院油料作物研究所,湖北武汉,430062;重庆市农业科学院果树研究所,重庆江津402260 ^[1] 农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室,中国农业科学院油料作物研究所,湖北武汉,430062 ^[2] 华中农业大学生命科学与技术学院,湖北武汉,430070 ^[3]

关键词甘蓝型油菜精氨酸脱羧酶基因同源克隆 RACE 原核表达

分类号 S565.403

栏目名称

遗传育种

发布时间 2012-05-25