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甘蓝型油菜抗苯磺隆突变体ALS基因分析与SNP标记

SNP markers for acetolactate synthase genes from tribenuron-methyl resistant mutants in Brassica napus L.

摘要为筛选新型甘蓝型油菜抗苯磺隆除草剂的等位基因特异分子标记,以EMS诱变的甘蓝型油菜中双9号M2群体(约30 000单株)为材料,通过苯磺隆喷药处理筛选到3株抗除草剂突变体(分别记为K1、K4、K5).利用PCR技术克隆到抗性突变体相应的BnALS1、BnALS2、BnALS3基因,序列分析结果表明,K1和K4的BnALS3基因序列发生碱基突变,其中第+ 535位C碱基突变为T,导致其编码的BnALS3蛋白第197位氨基酸由Pro突变为Ser;而K5的BnALS1基因序列第+544位C突变为T,导致其编码的BnALS1蛋白发生了Pro197Ser的改变(均以拟南芥ALS氨基酸序列为准).其中K5抗性位点BnALS1:Pro197Ser的改变属于首次报道.基于突变的基因序列设计了8对等位基因特异性PCR引物组合,有6对能用于区分抗性突变体和野生型材料,其中可检测K5的BnALS1基因SNP位点的引物有2对,可检测K1、K4突变体BnALS3基因SNP位点的引物有4对.

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