摘要目的 建立细胞因子释放综合征(CRS)的体外评价方法,对试验体系细胞密度、阳性药种类及浓度进行探索.方法 分别用CD3抗体(OKT3)(0.1～5 μg)、OKT3(0.1～1 μg)+CD28抗体(anti-CD28)(1、2 μg·mL-1)、佛波酯(PMA)(10～100 ng·mL-1)、PMA(10～100 ng·mL-1)+离子霉素(ION)(1、5 μg·mL-1)刺激外周血单个核细胞(PBMC)48 h,用CCK-8 法检测细胞增殖情况来筛选PBMC的最佳密度及药物的最佳浓度.实验分为 7 组:对照组、OKT3 0.1 μg+anti-CD28 1 μg·mL-1 组、OKT3 0.5 μg+anti-CD28 1 μg·mL-1 组、OKT3 1 μg+anti-CD28 1 μg·mL-1 组、PMA 10 ng·mL-1+ION 1 μg·mL-1 组、PMA 25 ng·mL-1+ION 1 μg·mL-1 组、PMA 50 ng·mL-1+ION 1 μg·mL-1组,分别与PBMC细胞暴露 48 h,收集细胞上清,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测药物作用下PBMC释放细胞因子白介素-6(IL-6)、干扰素γ(IFN-γ)情况.结果 与对照组相比,OKT3 和PMA均引起中密度、高密度PBMC显著增殖,各剂量OKT3 和PMA均引起细胞增殖.与阳性药单独使用相比,药物联合使用产生更强的细胞活化效应.与对照组相比,在OKT3(0.1～1 μg)+anti-CD28(1 μg·mL-1)作用下,PBMC释放IL-6、IFN-γ显著增加;在PMA(10～50 ng·mL-1)+ION(1 μg·mL-1)作用下,PBMC分泌IFN-γ与对照组相比显著增加,在PMA(25～50 ng·mL-1)+ION(1 μg·mL-1)作用下,PBMC分泌IL-6与对照组相比显著增加.结论 确定了PBMC体外CRS风险评价方法的细胞密度、阳性药物种类及浓度、药物联合使用浓度.