利用细胞培养基或动物血浆中的荧光标记产物测定鞘磷脂合酶活性

Sphingomyelin synthase activity measurement by the fluorescent product in cell culture medium or animal plasma

导出 OA 学术成果认领

摘要鞘磷脂合酶(SMS)催化神经酰胺(ceramide,Cer.)转变为鞘磷脂(sphingomyelin,SM).近来的研究表明神经酰胺和鞘磷脂参与了代谢综合征的过程,因而鞘磷脂合酶被认为是开发抗代谢综合征药物的潜在靶点.鞘磷脂合酶有两个同工酶,分别称为鞘磷脂合酶1 (SMS1)和鞘磷脂合酶2(SMS2).这两种同工酶的亚细胞定位不同,在不同组织中的表达水平也有差异.到目前为止,己发表有多种方法测定组织和细胞匀浆中的总SMS活性,这些方法通过分析总反应体系或细胞内的酶促反应产物来衡量SMS活性.本文介绍一种测定SMS活性或筛选SMS抑制剂的新方法.我们将荧光标记的神经酰胺(NBD-Cer.)作为底物与细胞孵育,或者将该底物注射到小鼠体内,然后监测在细胞培养基或小鼠血浆中出现的荧光标记的鞘磷脂(NBD-SM)的含量.采用这种办法可有效检测出D609(一种鞘磷脂合酶抑制剂)对细胞和小鼠整体SMS活性的抑制作用.我们进一步采用该方法检测了SMS1基因敲除小鼠和SMS2基因敲除小鼠的SMS活性,结果发现注射底物后,SMS2基因敲除小鼠(而不是SMS1基因敲除小鼠)血浆中NBD-SM的堆积被明显阻断.因而该方法可用于检测生理或药理条件下在体或离体组织的SMS活性、筛选SMS抑制剂、甚至筛选SMS2特异性抑制剂.