换一批腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶的表达、纯化及晶体分析
Expression, Purification, and Crystallization of A Novel Galactose Mutarotase from Thermoanaerobacter Tengcongensis
摘要目的 纯化腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶TTE1925,用于晶体生长和三维结构分析.方法 将tte 1925基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化E. coli BL 21(DE 3)后获得表达菌株.该菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导高效表达出带有谷胱甘肽S转移酶标签的可溶性融合蛋白,经过Glutathione Sepharose~(TM)4B亲和层析、Resource Q 6mL离子交换层析和10/300 superdex 200分子筛层析纯化后,得到目的 蛋白TTE1925.结果 纯化后蛋白的纯度达到99%以上.蛋白采用悬滴气相扩散法得到衍射至1.9(A)的棒状晶体.结论 成功制备了高纯度TTE1925蛋白,获得TTE1925蛋白质晶体,为进一步解析变旋酶的三维结构及其生物学功能分子机制研究奠定了基础.
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关键词
腾冲菌TTE1925半乳糖变旋酶原核表达蛋白质纯化结晶Thermoanaerobacter tengcongensisTTE1925galactose mutarotaseprokaryotic expressionprotein purificationcrystallization
医学主题词
蛋白(Egg White)晶体(Lens, Crystalline)热温度(Hot Temperature)细菌, 厌氧(Bacteria, Anaerobic)半乳糖(Galactose)
栏目名称
DOI
10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.008
发布时间
2010-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点基础研究发展计划（973计划）（2006CB504001）
重大研究计划（2006CB944002）
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