摘要目的 研究LncRNA MIR99AHG(MIR99AHG)在化疗药物导致的卵巢颗粒细胞凋亡中的作用及其潜在的调节机制.方法 采集正常女性和卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)患者的卵泡液,检测MIR99AHG表达.将卵巢颗粒细胞KGN分为对照组、顺铂组、顺铂+NC shRNA组、顺铂+sh-MIR99AHG组、顺铂+vector 组、顺铂+OE-METTL3 组、顺铂+OE-METTL3+OE-MIR99AHG 组、顺铂+OE-MIR99AHG 组、顺铂+NC mimic 组、顺铂+miR-136-5p mimic 组及顺铂+sh-MIR99AHG+NC inhibitor 组和顺铂+sh-MIR99AHG+miR-136-5p inhibitor组.KGN细胞经相应载体或质粒处理后,采用RIP分析MIR99AHG的m6A修饰水平;在线数据库预测MIR99AHG与miR-136-5p的结合位点,并通过荧光素酶报告基因分析进行验证;采用CCK-8和流式细胞术分析KGN细胞的活力和凋亡水平;ELISA检测Caspase-3酶活性;Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2和Bax表达水平.结果 与正常女性相比,POF患者卵泡液中MIR99AHG表达水平显著上调(P＜0.001).与对照组相比,顺铂处理组KGN细胞中MIR99AHG表达显著上调,METTL3表达及蛋白水平显著下调(P＜0.05).与对照组相比,顺铂处理组KGN细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高(P＜0.05);而与NC shRNA组相比,sh-MIR99AHG组KGN细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低(P＜0.05).RIP分析发现,Anti-m6A抗体下拉复合物中MIR99AHG显著富集.与vector组相比,OE-METTL3组MIR99AHG的m6A水平显著升高,MIR99AHG mRNA表达水平显著降低(P＜0.05);OE-METTL3组KGN细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低(P＜0.05);共转染OE-MIR99AHG可逆转OE-METTL3对KGN细胞活力、凋亡及相关蛋白表达的影响.miR-136-5p与MIR99AHGA存在结合位点,MIR99AHGA负调控miR-136-5p表达.与NC-mimic组相比,miR-136-5p mimic组细胞活力及BCL-2蛋白表达明显升高,细胞凋亡率、Caspase-3酶活性及Bax蛋白表达明显降低(P＜0.05).共转染miR-136-5p inhibitor逆转了 sh-MIR99AHG对细胞KGN细胞活力、凋亡及相关蛋白表达的影响(P＜0.05).结论 顺铂诱导MIR99AHG在卵巢颗粒细胞中上调,METTL3通过m6A甲基化修饰抑制MIR99AHG表达,促进MIR99AHG靶标miR-136-5p的上调,从而抑制卵巢颗粒细胞凋亡,改善化疗药物顺铂介导的卵巢早衰.