换一批人 MicroRNA-335阳性对照质粒真核表达载体的构建及意义
Construction of the eukaryotic expres ion vector for positive control plasmid of hum an MicroRNA-335 and it′s significance
摘要目的：构建人MicroRNA－335（ has－miR－335）阳性对照质粒表达载体。方法根据与has －miR－335“种子区”完全匹配的序列设计并合成一对互补的寡聚核苷酸链，经过缓慢降温退火得到目的小片段。将退火产物连接入荧光素酶报告基因载体pMIR－REPORT而得到has－miR－335阳性对照重组质粒。应用Lipo－fectamine 2000将has－miR－335阳性对照重组质粒、pMIR－REPORT空载体，分别与Pre－miRTM microRNA335 Pre－cursor共转染至293T7／17细胞，用双荧光素酶方法检测has－miR－335在真核细胞中表达水平。结果获得has－miR3－35阳性对照重组质粒，经测序结果正确。 has－miR－335与其阳性对照结合在真核细胞中的表达下降。结论成功构建了has－miR－335阳性对照质粒表达载体。该载体可用于确认has－miR－335实验中RNA提取、转染和基因表达检测方法是否可靠。 has－miR－335双荧光素酶报告基因检测体系的建立为进一步进行has－miR－335靶基因检测及验证奠定基础。
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关键词
人MicroRNA-335阳性对照质粒荧光素酶报告基因载体pMIR-REPORThas-miR-335Positive controlPlasmidLuciferase reporter vectorpMIR-REPORT
DOI
10.3969/j.issn.1674-3806.2015.01.01
发布时间
2015-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广西自然科学基金（2011GXNSFC018019）
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