换一批靶向RelA(p65)基因shRNA慢病毒载体构建及功能鉴定
Construction and functional verification of shRNA lentiviral vector targeting to RelA(p65)gene
摘要目的 构建靶向RelA(p65)基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体,并对其功能进行验证.方法 设计3 对针对RelA基因的RNA干扰序列,并合成相应的shRNA序列.shRNA退火形成双链oligo序列后应用基因重组技术构建重组质粒,经菌落聚合酶链式反应(PCR)及测序鉴定,将重组正确的质粒进行慢病毒包装和滴度测定,通过Western blot实验筛选出对HepG2 细胞株中RelA基因干扰效果最好的慢病毒,并通过CCK-8 检测Lenti-shRelA对细胞增殖活性的影响.结果 测序结果显示重组慢病毒载体与设计参考序列一致,提示重组慢病毒载体构建成功.重组慢病毒Y4056、Y21318、Y21319、Y21320 的滴度分别为3.13×108 TU/ml、2.97×108 TU/ml、2.51×108 TU/ml、3.40×108 TU/ml.用慢病毒Lenti-shRelA(Y21318、Y21319、Y21320、Y4056)感染HepG2 细胞,Western blot实验结果显示Y21320 对HepG2 细胞株中RelA基因的干扰效果最好.CCK-8 实验结果显示RelA的敲降可显著抑制细胞增殖活力.结论 该研究成功构建了靶向RelA基因shRNA慢病毒载体,其能有效下调HepG2 细胞RelA的表达并抑制细胞增殖,为进一步研究RelA在肝癌发生、发展中的机制奠定了基础.
更多相关知识
分类号
R735.7（消化系肿瘤）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1674-3806.2023.09.07
发布时间
2023-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
- 浏览46
- 被引4
- 下载7
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
