AGK基因启动子重组质粒构建及其在T淋巴细胞白血病中转录活性的研究

Construction of recombinant plasmid of AGK gene promoter and its transcriptional activity in T lymphocyte leukemia

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摘要目的研究T淋巴细胞白血病中酰基甘油激酶(acylglycerol kinase,AGK)上游转录机制,构建AGK基因启动子不同截短片段的重组质粒并检测其转录活性.方法利用TIMER2.0、The Human Protein Atlas、Gene Expression Profiling Interactive Analysis等公共数据库探索AGK在白血病中的作用,以pGL4.20-pAGK promoter-luciferase全长质粒为模板,利用PCR法分别扩增AGK启动子不同长度的截短片段;将扩增片段分别插入pGL4.20-basic载体,构建AGK启动子不同截短片段重组质粒;经双酶切及序列鉴定正确后,将重组质粒电击转染至人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat中,采用双荧光素酶报告基因实验测定AGK启动子不同截短片段的双荧光素酶活性.结果 AGK在多种类型肿瘤中表达上调(P＜0.05),且在白血病细胞中处于较高水平.Log-rank检验结果显示AGK高表达患者的总生存期短于低表达患者(P=0.028).JASPAR网站预测出3个评分高的转录因子TEAD与AGK的结合区域,并成功构建含AGK基因启动子不同截短片段重组质粒.双荧光素酶报告基因实验发现T淋巴细胞白血病细胞中AGK启动子转录活性在-540 bp至-80 bp区域较高.结论人T淋巴细胞白血病细胞中AGK基因启动子在-540 bp至-80 bp区域的转录活性较高,可为进一步研究T淋巴细胞白血病中AGK的转录及其上游调控机制奠定基础.