摘要目的 基于生信挖掘与实验验证筛选卵巢癌复发及干性相关关键基因复制因子C亚基5(replication factor C subunit 5,RFC5),并探讨其作用机制.方法 收集2024年3月至2025年3月在四川大学华西第二医院妇产科收治的7例卵巢癌患者的癌组织,从中分离得到原代卵巢癌细胞.体外无血清悬浮培养法富集卵巢癌干细胞(ovarian cancer stem cells,OCSCs),并进行转录组测序.结合加权基因共表达网络分析筛选关键候选基因.利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析其临床预后价值;结合CIBERSORT算法评估其与免疫微环境的关联;基于单细胞转录组数据进行拟时序轨迹与虚拟敲减分析,探索其在肿瘤复发中的作用与下游通路;最后通过siRNA干扰、慢病毒感染分别构建RFC5敲低和过表达的OCSCs模型,利用qRT-PCR、干细胞成球及CCK-8实验验证RFC5对OCSCs成球能力及增殖活性的影响.结果 筛选出RFC5为复发及干性相关关键基因,其高表达显著缩短患者无进展生存期(P=0.002)和总生存期(P=0.039).生物信息学分析显示RFC5随肿瘤复发呈动态上调,富集于氧化磷酸化等通路,并与na?ve CD4+T细胞浸润呈显著负相关(r=-0.745).体外实验证实RFC5在OCSCs中高表达(P<0.05);敲减后显著抑制OCSCs细胞成球及增殖能力,而过表达RFC5则产生相反效应(均P<0.05).结论 RFC5是与卵巢癌复发及干性维持密切相关的关键基因,可促进OCSCs成球能力和增殖活性,其可能通过影响免疫微环境及调控氧化磷酸化等代谢通路促进肿瘤复发.RFC5有望成为卵巢癌预后评估及复发治疗的新靶点,但仍需更大样本及更深入的机制实验进一步验证.