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靶向hiPSCs-CMs的miRNA-452/Let7i超声分子探针构建

Construction of miRNA-452/Let7i Ultrasound Molecular Probes Targeting hiPSCs-CMs

摘要目的 构建载miRNA-452/Let-7i的超声分子探针,体外分析其对人诱导多能干细胞来源心肌细胞(hiPSCs-CMs)的靶向效果.材料与方法 合成生物素化核心脂质微泡(NBs)、携带过表达miRNA-452/Let-7i的腺病毒的脂质微泡(Ad-miR-452/Let-7i)和携带过表达miRNA-452/Let-7i的腺病毒及靶向蛋白MYH6 的超声分子探针(Ad-miR-452/Let7i-MYH6),比较荧光蛋白表达率验证其结合情况.测量其理化性质、稳定性及体外造影成像能力,评估生物安全性等.将hiPSCs-CMs分为Ad-miR-452/Let-7i组和Ad-miR-452/Let7i-MYH6组,比较细胞结合情况.结果 构建的NBs、Ad-miR-452/Let-7i以及Ad-miR-452/Let7i-MYH6形态规则,稳定性好;其浓度分别为(1.62±0.40)×108个/ml、(1.83±0.20)×108个/ml、(1.35±0.33)×108个/ml,平均粒径分别为(605.94±17.46)nm、(726.53±14.95)nm、(729.31±16.62)nm,电位分别为(2.61±0.30)mV、(-11.21±0.71)mV、(-12.28±0.52)mV,分散度分别为0.24±0.07、0.26±0.14、0.25±0.13.在浓度为107个/ml时,3种样品的造影强度分别为99.24±5.04、102.18±3.61、99.07±3.87.载miRNAs超声分子探针对细胞无明显毒性,体外显影持续超过15 min,可与hiPSC-CMs特异性结合.结论 本研究构建的超声分子探针具有稳定性及体外靶向性,能有效提高病毒转染效率.

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