换一批阿胶中动物源性DNA提取方法的改进及驴源性成分鉴定
Improvement of Extraction Method of Animal-derived DNA from Colla Corii Asini and Identification of Donkey-Derived Components
摘要目的 从高温熬制的阿胶制品中提取微量动物源性DNA,建立并优化聚合酶链反应(PCR)方法快速鉴定阿胶中驴源性成分,建立分子生物学鉴定阿胶品质新方法.方法 应用DNA纯化柱替代十二烷基硫酸钠-蛋白酶K(SDS-PK)方法中酚、氯仿等毒性较大的有机溶剂提取阿胶中驴源性基因组DNA,并对SDS-PK方法进行优化.结果 提取驴源性基因组DNA最佳阿胶样本量为0.20 g,水浴消化1h再进行DNA纯化柱处理可快速获得高质量阿胶基因组DNA,纯度均在1.70～1.80之间,可达到(187.8±0.56)ng· μL-1.应用特异性引物进行PCR扩增、克隆、测序,与GenBank已登记的驴物种(MG931481.1)相似性为100％.结论 本实验能在90 min内从深加工的阿胶及阿胶制品中提出动物源性基因组DNA片段,提取的DNA纯度和浓度能满足阿胶分子生物学鉴定的要求,建立的PCR方法可快速鉴定阿胶中驴源性成分;克隆得到驴特异性基因片段可作为鉴定阿胶真伪的标准化阳性对照,预期将广泛应用到阿胶及相关制品的质量监督工作中.
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分类号
R284（中药学）
栏目名称
DOI
10.11669/cpj.2019.22.004
发布时间
2020-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
吉林省科技发展计划（20180201023YY）
吉林省科技发展计划（20190301014NY）
吉林省科技发展计划（20190303093SF）
吉林省科技发展计划（20170307001YY）
吉林省科技创新中心建设项目（20190902018TC）
北华大学研究生创新计划项目
国家级大学生创新创业训练计划项目（201811923006）
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