换一批全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析尤瑞克林电荷异质性方法的建立与应用
Establishment and Application of ICIEF for the Analysis of Charge Heterogeneity of Human Urinary Kini-nogenase
摘要目的 建立全柱成像毛细管等电聚焦电泳(image capillary isoelectric focusing,iCIEF)方法分析尤瑞克林(human urinary kininogenase,HUK)的电荷异质性.方法 取35μL1％甲基纤维素、10 μL 200 mmol·L-1的亚氨基二乙酸、4μL两性电解质溶液、48 mg尿素、等电点(pI)为6.14和7.05的等电点标记物各0.5μL及水,配制为100 μL供试品体系进行聚焦分析,聚焦条件为预聚焦电压1 500 V、持续时间1 min,聚焦电压3 000 V、持续时间6 min.结果 优化后的方法专属性良好、准确度验证中回收率在90％～110％之间;线性验证结果的r2为0.995 7;重复性验证中的各异构体的pI的相对标准偏差(RSD)均小于0.2％,定量限为0.013 mg·mL-1;IDA及两性电解质等添加量的耐用性良好.采用该方法可以有效分离不同厂家的HUK电荷异构体.结论 建立的iCIEF方法具有良好的专属性、精密度、准确度和耐用性,能够很好地解决蛋白质类产品的电荷异质性评价的难题,对该类产品在电荷异质性角度的质量控制具有重要意义.
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关键词
尤瑞克林糖蛋白电荷异质体全柱成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)human urinary kininogenaseglycoproteincharge heterogeneityimage capillary isoelectric focusing(iCIEF)
分类号
R917（药物分析）
栏目名称
DOI
10.11669/cpj.2024.16.011
发布时间
2024-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
中国食品药品检定研究院关键技术研究基金（GJJS-2022-5-2）
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