活菌核酸微定量技术评价抗菌药物对胞内鲍曼不动杆菌感染的影响

Evaluation of the Efficiency of Antibiotics on the Intracellular Infection of Acinetobacter Baumannii Based on the Micro-Quantification Method of Nucleic Acid for Live Bacteria

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摘要目的建立测定细胞内活菌含量的活菌核酸微定量技术,考察临床常用抗菌药物对胞内鲍曼不动杆菌感染的影响.方法采用抗菌药物-病原菌-上皮细胞共培养模型,以改良叠氮溴化丙锭-实时荧光定量聚合酶链反应(PMAxx-qPCR)法测定不同种类和不同浓度的抗菌药物对鲍曼不动杆菌侵袭人支气管上皮(HBE)细胞形成胞内菌数量的影响;显微镜下观察0.1倍最低抑菌浓度(MIC)庆大霉素对绿色荧光蛋白融合鲍曼不动杆菌(AB-GFP)侵袭HBE细胞的影响.结果与对照组比较,经0.1倍、1倍、10倍MIC的阿奇霉素、左氧氟沙星、头孢哌酮舒巴坦、替加环素,以及10倍、1倍MIC的多西环素、庆大霉素干预的鲍曼不动杆菌侵袭HBE细胞形成胞内菌的数量均显著降低(P＜0.001);经0.1倍MIC的庆大霉素干预的胞内鲍曼不动杆菌的数量均显著升高(P＜0.001).在0.1倍MIC的庆大霉素作用下,AB-GFP侵袭进入HBE细胞的量显著增加.结论 0.1倍、1倍、10倍MIC的阿奇霉素、左氧氟沙星、头孢哌酮舒巴坦、替加环素、庆大霉素、多西环素均不能有效杀灭胞内菌.该方法操作简便、结果准确,能快速地测定胞内鲍曼不动杆菌的浓度,可用于评价抗菌药物对胞内鲍曼不动杆菌感染的影响,以及胞内鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性.