摘要目的 探讨益肾壮腰丸通过核因子-κB抑制蛋白/肿瘤坏死因子/基质金属蛋白酶 9(IκB/TNF/MMP9)信号通路治疗骨质疏松症(OP)的潜在作用机制.方法 采用高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(HPLC-Q-Orbitrap-MS)法对益肾壮腰丸进行成分定性分析;结合TCMSP,SwissTargetPrediction,GeneCards等数据库进行网络药理学分析,以预测作用机制;采用动物实验验证益肾壮腰丸治疗OP的作用.将健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、益肾壮腰丸低剂量组(C1 组,1.26g/kg)、益肾壮腰丸高剂量组(C2 组,2.52g/kg)及雌二醇阳性药对照组(D组,0.1mg/kg),构建双侧去卵巢(OVX)OP大鼠模型,造模成功 4 周后,除A组和B组大鼠灌胃等体积纯化水外,其余各组大鼠灌胃相应药物,共干预 8 周.采用微型计算机断层扫描仪分析大鼠的骨微结构指标[骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度与骨小梁数量的比值(Tb.Th/Tb.N)、骨小梁间距(Tb.Sp)、松质骨体积(TBV)、结构模型指数(SMI)]的变化;经苏木精-伊红(HE)染色评估益肾壮腰丸对大鼠骨小梁的影响;采用酶联免疫吸附试验(ELSA)法测定大鼠的血清炎性因子[白细胞介素 1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]及骨代谢标志物[Ⅰ型胶原β-C端肽(β-CTX)、组织蛋白酶K(CTSK)]表达水平;采用免疫组化法测定大鼠骨组织中骨代谢蛋白[抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、c-FOS蛋白(c-FOS)、MMP9、细胞外信号调节激酶(ERK)、骨钙素(OCN)]的表达水平.结果 共鉴定出益肾壮腰丸化学成分 61 种,可能作用于MMP9、CTSK、B细胞κ轻链增强抑制因子激酶β(IKBKB)等核心靶点,并富集于炎症(如TNF)、氧化应激(如低氧诱导因子-1)等信号通路.动物实验结果显示,与B组比较,C2组大鼠的BMD,BV/TV,Tb.N,Tb.Th,TBV,OCN,IκB表达水平及骨小梁面积占比均显著升高(P<0.05),Tb.Sp,IL-1β,TNF-α,CTSK,TRAP,c-FOS,MMP9,ERK 表达水平均显著降低(P<0.01);C1 组大鼠的Tb.Th显著升高(P<0.05),CTSK和TRAP表达水平均显著降低(P<0.01).结论 益肾壮腰丸可能通过调节IκB/TNF/MMP9 信号轴,影响CTSK,TRAP,c-FOS,MMP9 的表达水平,抑制大鼠的炎性反应和骨代谢,从而延缓OP的进展.