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联合酶解法结合UPLC Q-TOF高分辨质谱检测重组水蛭素蛋白的二硫键结构

Determination of the Disulfide Bonds in Recombinant Hirudin Protein by Joint Enzymes Digestion with UPLC Q-TOF High Resolution Mass Spectrometry

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摘要采用联合酶切法结合UPLC Q-TOF高分辨质谱解析重组水蛭素蛋白的复杂二硫键交联结构.首先从蛋白水平验证重组水蛭素蛋白是否含有游离半胱氨酸,包括高分辨质谱表征相对分子质量和定量检测游离巯基;然后利用单一酶解法标注每个或每组二硫键在蛋白序列中所处的位置;最后根据单酶所测结果,设计混合酶切的方式确定具体的二硫键配对方式,并利用二硫苏糖醇还原法加以验证,最终确证重组水蛭素蛋白的二硫键位置.结果显示,重组水蛭素蛋白存在 10 个半胱氨酸,共形成 5 对二硫键,分别为 $1(Cys1-Cys2)、$2-(S)3(Cys3-Cys5/Cys4-Cys6 或 Cys3-Cys6/Cys4-Cys5)、$4(Cys7-Cys9)和(S)5(Cys8-Cys10).

作者徐金华 ^[1] 赵丽丽 ^[2] 柳常青 ^[3] 张贵民 ^[4] 刘忠 ^[4] 学术成果认领

作者单位山东新时代药业有限公司,山东临沂 273400;哺乳动物细胞高效表达国家工程实验室,山东临沂 273400 ^[1] 哺乳动物细胞高效表达国家工程实验室,山东临沂 273400;鲁南新时代生物技术有限公司,山东临沂 273400 ^[2] 山东新时代药业有限公司,山东临沂 273400 ^[3] 鲁南制药集团股份有限公司,山东临沂 276000 ^[4]

关键词 UPLC Q-TOF高分辨质谱二硫键蛋白类药物联合酶解 UPLC Q-TOF high resolution mass spectrometry disulfide bond protein drug joint enzyme digest

分类号 O657.63 TQ937

栏目名称

研究论文

DOI 10.16522/j.cnki.cjph.2023.11.013

发布时间 2024-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

山东省重点研发计划(泰山产业领军人才工程)项目（2018TSCYCX-30、tscy20200329、tscx202306088）