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换一批AAV衣壳亚基纯度分析中VP3变体峰的鉴定与机制研究
Characterization and Mechanism of VP3 Variant Peak in AAV Capsid Subunit Purity Analysis
摘要该研究旨在探究采用十二烷基硫酸钠-毛细管凝胶电泳(CE-SDS)技术分析腺相关病毒(AAV)衣壳亚基纯度时,VP3亚基峰前端产生未知信号峰的原因.先采用PCR法对重组腺相关病毒(rAAV)衣壳蛋白VP3亚基碱基序列的第2位起始密码子进行位点突变,获得突变后的rAAV,再通过CE-SDS技术鉴定该位点突变与该未知信号峰的关联性,结合LC-MS对未知峰的相对分子质量进行检测和肽段分析.结果表明,VP3亚基碱基序列中如含有2个起始密码子(ATG),则可能从第2个起始密码子开始翻译,表达产物为亚基VP3变体(VP3'),即对应CE-SDS技术检测到的未知信号峰.在对AAV衣壳蛋白进行亚基纯度分析时应将其作为AAV衣壳亚基峰.
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关键词
十二烷基硫酸钠-毛细管凝胶电泳技术重组腺相关病毒纯度衣壳亚基VP3变体峰capillary electrophoresis sodium dodecyl sulfate techniquerecombinant adeno-associated viruspuritycapsidsubunit VP3 variant peak
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DOI
10.16522/j.cnki.cjph.2024.08.017
发布时间
2024-09-27
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