换一批乙醇脱氢酶的克隆表达及酶活优化
Cloning and expression of alcohol dehydrogenase and optimization of biotransformation conditions
摘要目的 构建表达重组粗糙脉孢菌乙醇脱氢酶的工程菌,并对乙醇脱氢酶酶活测定条件进行优化,为氧化还原酶酶法催化在手性药物中间体合成中的应用提供指导.方法 采用 PCR技术,以粗糙脉孢菌基因组 DNA为模板,克隆得到粗糙脉孢菌乙醇脱氢酶基因,连接到表达载体 pET-28a上,得到重组质粒 pET-ADH.将该重组质粒导入大肠杆菌 BL21中,并经培养、筛选、酶切、测序鉴定.用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并测酶活力,同时对影响酶活的条件进行研究.结果 粗糙脉孢菌乙醇脱氢酶活力较高,最适反应介质为 Tris-HCl缓冲液,在 30 ~ 35℃、pH 7 ~ 8时酶活力较稳定,较适底物为 2-氯苯乙酮.结论 通过采用 PCR技术,成功克隆表达粗糙脉孢菌乙醇脱氢酶,并优化得到最优酶活条件.
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栏目名称
DOI
10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2015.04.018
发布时间
2015-09-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
科技型中小企业技术创新基金（12C26214505686）
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