换一批
换一批重组蛋白AdipoR1-EGFP真核表达质粒的构建和表达
Construction and expression of eukaryotic expression vector for AdipoR1-EGFP recombinant protein
摘要目的 构建重组pEGFP-N1-AdipoR1真核表达质粒并于HEK293T细胞中瞬时表达.方法 提取HepG2细胞总RNA,逆转录合成cDNA,以其为模板,PCR扩增AdipoR1基因,将其插入到pEGFP-N1质粒中,构建重组真核表达质粒pEGFP-N1-AdipoR1,通过脂质体法转染HEK293T细胞,采用酶标仪测定荧光强度,Western blot方法鉴定融合蛋白AdipoR1-EGFP的表达情况.结果 Western blot结果显示,融合蛋白AdipoR1-EGFP在分子量约70 kD处可见明显的目的条带;同时,与未转染质粒的空白对照组相比,转染pEGFP-N1和pEGFP-N1-AdipoR1的细胞中荧光强度都有明显升高,表明融合蛋白AdipoR1-EGFP在HEK293T细胞中成功表达,并且EGFP的荧光强度测定能很好地反映细胞中融合蛋白的表达水平.结论 构建并表达AdipoR1-EGFP融合蛋白,所采用的EGFP融合蛋白表达方法简单高效,重复性好,为今后AdipoR1蛋白的表达及功能研究提供了重要参考.
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栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1673-713X.2017.03.004
发布时间
2017-06-30
基金项目
国家自然科学基金
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