换一批
换一批靶向PLK1 PBD小分子抑制剂荧光偏振高通量筛选模型的建立
Development of a novel fluorescence polarization-based high-throughput screening method for PLK1 PBD inhibitors
摘要目的 建立适用于靶向PLK1 PBD小分子抑制剂规模化筛选的荧光偏振高通量筛选模型.方法 以pET-28a-PLK1 PBD质粒转化E.coli Rosetta BL21(DE3),诱导表达并纯化PLK1 PBD蛋白.利用荧光偏振原理,以FITC-Poloboxtide作为分子探针,优选分子探针和PLK1 PBD最佳工作浓度,建立适用于PLK1 PBD小分子抑制剂筛选的荧光偏振高通量筛选模型.同时采用上述建立的荧光偏振筛选模型检测poloxin的抑制活性.结果 成功诱导表达并纯化PLK1 PBD蛋白.选用30 nmol/L分子探针和200 nmol/L PLK1 PBD蛋白建立荧光偏振高通量筛选模型,其Z'因子可达0.74.基于该方法,检测poloxin的抑制活性,其IC50值为(4.27±0.69)μmol/L.结论 成功建立了适用于靶向PLK1 PBD小分子抑制剂筛选的荧光偏振高通量筛选模型.
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关键词
荧光偏振免疫测定高通量筛选分析PLK1 PBD抑制剂Fluorescence polarization immunoassayHigh-throughput screening assaysPLK1 PBD inhibitors
主题词
高通量筛选分析(High-Throughput Screening Assays)荧光偏振(Fluorescence Polarization)荧光偏振免疫测定(Fluorescence Polarization Immunoassay)蛋白(Egg White)分子探针(Molecular Probes)
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1673-713X.2017.05.001
发布时间
2018-03-12
基金项目
国家自然科学基金面上项目
吉林省科技发展计划
皖南医学院博士科研启动基金
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